第281章 变异感染者DNA提取（2 / 2）

4. 准备70c温浴。

5. 使用前检查buffer bL 是否有沉淀析出，若出现沉淀，请于70c温浴加热至沉淀完全溶解后再使用。

完成试剂准备工作之后，在钟教授的首肯之下，研究员开始进行dNA的提取。

具体操作步骤如下：

1. 向96 圆孔板的每孔中加入20 ul 蛋白酶K。

2. 加200 ul 抗凝全血到96 圆孔板中。

~undefed 若全血样品体积少于200 ul，用pbS 补充到200 ul。

~undefed 若样品为鸟类血，样品用量须低于10 ul。

~undefed 若需得到RNA-free 的基因组dNA，在步骤3 加入buffer bL 前加入dNase-free 的RNase A(20 g\/ l) 。

3. 加200 ul buffer bL ，注意不要打湿每孔的边缘，用96 圆孔硅胶片密封各孔。

4. 用力混合30 s。

5. 3000 rp 简短离心使96 圆孔硅胶片上的溶液到96圆孔板内。启动离心机，当速度达到3000rp后即停止。

6. 在培养箱或烘箱中70c温浴至少10 。

7. 3 000 rp 简短离心使96 圆孔硅胶片上的溶液到96圆孔板内。启动离心机，当速度达到3 000rp后即停止。

8. 取下96 圆孔硅胶片，每孔加入200 ul 乙醇（96-100%）。

9. 用96 圆孔硅胶片密封各孔，用力混匀混合15 s。3 000 rp 简短离心使96 圆孔硅胶片上的溶液到圆孔板内。启动离心机，当速度达到3 000 rp 后即停止。

10. 将96 孔dNA 板放到一洁净的96 孔1.6 l 深孔板。取下圆孔板上的96 圆孔硅胶片，将每孔中的溶液转移至96 孔dNA 板 中，6 000 rp 离心4 。

11. 丢弃96 孔1.6 l 深孔板的滤液，将96 孔dNA 板放回到96 孔1.6 l 深孔板上，每孔加入500 ul buffer w1b，用一新的bF-400 膜密封96 孔dNA 板，6 000 rp 离心4 。

~undefed 确认在buffer w1b trate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。

12. 丢弃96 孔1.6 l 深孔板的滤液，将96 孔dNA 板放回到96 孔1.6 l 深孔板上，每孔加入850 ul buffer w2，用另一新 的bF-400膜密封96孔dNA板，6 000 rp 离心4 。

~undefed 确认在buffer w2 trate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。

13. 弃滤液，将96孔dNA板放回到96孔1.6 l 深孔板上，每孔加入400 ul buffer w2， 用另一新的bF-400 膜密封96 孔dNA 板，6 000 rp 离心4 。

14. 将96孔dNA板放在一洁净的96 孔1.6 l 深孔板上，用bF-400膜密封96孔dNA板，6 000 rp离心15 。

15. 将96孔dNA板放在另一洁净的96 孔1.6 l 深孔板上，每孔加入100-200 ul Eent b 或去离子水，室温静置2 ，用另一新的bF-400膜密封96 孔dNA板，6 000 rp 离心4洗脱得到dNA。

看着最终提取出来的dNA样本，钟教授终于露出了满意的微笑......